Activarea celulelor T-helper/inductoare, T citotoxice, B și NK (natural killer) umane și inducerea activității celulelor natural killer împotriva celulelor de leucemie mieloidă cronică K562 cu pectină citrică modificată.

BMC Complement Altern Med. 2011 Aug 4;11:59. doi: 10.1186/1472-6882-11-59.

Activarea celulelor T-helper/inductoare, T citotoxice, B și NK (natural killer) umane și inducerea activității celulelor natural killer împotriva celulelor de leucemie mieloidă cronică K562 cu pectină citrică modificată.

Ramachandran C1, Wilk BJ, Hotchkiss A, Chau H, Eliaz I, Melnick SJ.

INFORMAȚII DESPRE AUTORI

REZUMAT

CONTEXT:

Pectina citrică modificată (MCP) este cunoscută pentru efectele sale anti-cancer și capacitatea sa de a fi absorbită și circulată în corpul uman. În acest raport, am testat capacitatea MCP de a induce activarea subgrupurilor de limfocite din sânge uman, cum ar fi celulele T, B și NK.

METODE:

Probe de sânge uman tratate cu MCP au fost incubate cu combinații specifice de anticorpi și analizate într-un citometru de flux utilizând un protocol cu ​​3 culori. Pentru a testa funcționalitatea celulelor NK activate, limfocitele normale izolate au fost tratate cu concentrații crescătoare de MCP. Au fost adăugate celule leucemice K562 marcate cu PKH26 la limfocite în faza log și incubate timp de 4 ore. Amestecul a fost colorat cu o formă activă marcată cu FITC a anticorpului caspazei 3 și analizat printr-un protocol de citometrie de flux în două culori. Procentul de celule K562 pozitive pentru PKH26 și FITC a fost calculat ca celulele moarte induse de celulele NK. Analiza monozaharidică a MCP a fost efectuată prin cromatografie performantă cu schimb de anioni, cu detecția amperometrică a impulsului (HPAEC-PAD).

REZULTATE:

Celulele T citotoxice și celulele B au fost activate cu MCP într-o manieră dependentă de doză și au indus o activare dependentă de doză semnificativă a celulelor NK. Celulele NK activate cu MCP au demonstrat funcționalitate în inducerea morții celulelor canceroase. MCP a constat din acizi oligogalacturonici cu unii conținând capete nereducătoare 4,5 nesaturate.

CONCLUZII:

MCP are proprietăți imunostimulatorii în probele de sânge uman, incluzând activarea celulelor NK funcționale împotriva celulelor leucemice K562 în cultură. Acizii oligogalacturonici nesaturați par a fi carbohidrații imunostimulatori în MCP.

PMID:

21816083

PMCID:

PMC3161912

DOI:

10.1186/1472-6882-11-59

[Indexat pentru MEDLINE]

Articol PMC gratuit:

Activarea celulelor T-helper/inductoare, T citotoxice, B și NK (natural killer) umane și inducerea activității celulelor natural killer împotriva celulelor de leucemie mieloidă cronică K562 cu pectină citrică modificată.

Cheppail Ramachandran, 1 Barry J Wilk,2 Arland Hotchkiss,3,4 Hoa Chau,3,3 Isaac Eliaz,2 andSteven J Melnick1,5

Informații despre autori ► Note despre articol ► Informații despre drepturile de autor și licențăPrecizări legale

Acest articol a fost citat de alte articole din PMC.

Rezumat

Mergi la:

Context

Pectina este o fibră complex de carbohidrat solubilă. S-a dovedit că fibrele dietetice cum ar fi pectina au efecte pozitive asupra unui spectru larg de condiții patologice. Influența lor pozitivă asupra sănătății umane se explică prin efectele lor antioxidante, hipocolesterolemice și anticanceroase [112]. Efectul asupra sistemului imunitar a fost atribuit anterior reglementării în sensul scăderii răspunsului inflamator, moderând producția de citokine pro-inflamatorii și imunoglobuline în modele murine pentru sindromul de colon iritabil [13]. O dietă bogată în fibre solubile într-un model animal a arătat protecția împotriva comportamentului bolii induse de endotoxină prin modularea citokinelor și promovarea activării alternative a macrofagelor [14]. Pectina citrică are capacitatea de a exercita un răspuns imunomodulator favorabil în celulele sanguine periferice umane prin efectul asupra producției de citokine [15]. Pectina citrică metoxi ridicată inhibă legarea factorului-1 de creștere fibroblastic (FGF-1) de receptorul său în prezența heparinei [16]. Fracția de ramnogalacturonan I-arabinan a pectinei dintr-o plantă medicinală îmbunătățește secreția factorului de stimulare a coloniilor de granulocite (G-CSF) de către celulele colonice murine MCE 301 [17]. S-a raportat, de asemenea, că ramnogalacturonan I-arabinogalactan activează celulele macrofage și dendritice [18]. Oligozaharidele pectice esterificate cu metil, cu capete nereducătoare 4,5-nesaturate au îmbunătățit hipersensibilitatea de tip tardiv dependentă de T-helper1 (Th1) într-un model de vaccin gripal murin, au redus producția de citokină Th2 (IL-4, IL-5 și IL-10) în splenocite in vitro [19] și au redus astmul alergic la șoareci [20]. Prin urmare, compoziția de carbohidrați a pectinei este foarte importantă în determinarea diferitelor răspunsuri imune.

Pectina citrică modificată (MCP) utilizată în acest studiu este compusă din lanțuri de carbohidrați scurte, ușor ramificate, derivate din fracția solubilă de albedo din coaja de citrice modificată prin scăderea greutății moleculare și a gradului de esterificare utilizând pH, temperatură și un proces controlat enzimatic, pentru a crește absorbția sa în sistemul circulator. MCP este relativ bogată în galactoză și antagonizează o proteină de legare galectina-3 (Gal-3), care are ca rezultat suprimarea agregării celulelor canceroase, a aderenței și a metastazelor [5, 6]. MCP acționează ca un ligand pentru Gal3, care joacă un rol major în formarea și progresia tumorii [12,2124]. S-a demonstrat că, prin utilizarea unei combinații de microscopie fluorescentă, citometrie în flux și microscopie cu forță atomică, legătura specifică a galactanului pectină cu forma recombinată a galectinei-3 umane a fost observată fizic [25]. În plus, MCP a arătat, de asemenea, efecte anti-metastatice asupra celulelor canceroase in vitro sau in vivo [8,10,11,24,2628]. Studiile clinice cu MCP la oameni au arătat o creștere a timpului de dublare a antigenului specific prostatei, un marker de încetinire a progresiei cancerului de prostată [9] și o îmbunătățire semnificativă a calității vieții și stabilizarea bolii la pacienții cu tumori solide avansate [29]. Pe lângă rolul terapeutic împotriva cancerului, s-a demonstrat că MCP îndepărtează metalele toxice din organism [30, 31] și reduce lezarea rinichilor și fibroza indusă experimental in vivo prin reducerea nivelurilor de galectină-3 [32]. În Statele Unite ale Americii, MCP este înregistrat ca un supliment alimentar și este în general considerat sigur (GRAS).

Activarea limfocitelor in vitro reprezintă o abordare standard pentru evaluarea răspunsurilor mediate de celule la o varietate de stimuli incluzând extractele botanice imunostimulatoare. Un sistem de testare adecvat monitorizează expresia markerului de activare incipientă CD69 în sângele integral după stimularea cu extracte. CD69 este exprimat în toate subseturile de limfocite activate și, prin urmare, reprezintă un marker generic pentru a monitoriza răspunsurile individuale ale subseturilor la stimuli specifici [33]. Antigenul CD4 este exprimat pe subsetul limfocitelor T-helper/inductoare (CD3/CD4). Antigenul CD8 este exprimat pe subsetul limfocitelor T citotoxice umane (CD3/CD8). După ce au fost activate, atât celulele T pozitive CD4 cât și CD8 exprimă CD69. Subseturile de limfocite T pot fi identificate și cuantificate prin utilizarea combinațiilor de anticorpi marcați cu fluorochromi cum ar fi CD4/CD69/CD3 și CD8/CD69/CD3. Antigenul CD19 este prezent pe limfocitele B umane în toate etapele maturizării și nu este prezent pe limfocitele T în repaus sau activate. Combinația de anticorpi marcată CD19/CD69/CD45 poate fi utilizată pentru a identifica o populație de celule B activate. Antigenul CD56 este prezent pe celulele Natural Killer (NK) și crește intensitatea antigenului cu activarea celulelor NK. Astfel, combinația de anticorpi marcată CD56/CD69/CD45 poate fi utilizată pentru a identifica celulele NK activate. Capacitatea subsetului de celule NK în limfocite normale de a induce moartea în celulele leucemice este analizată prin co-incubarea limfocitelor tratate cu MCP cu celule leucemice K562 din celule T. În acest raport am testat capacitatea MCP de a induce activarea subseturilor de limfocite din sânge uman (T-helper/inductoare, T citotoxice, B și NK) și activitatea celulelor NK indusă împotriva celulelor leucemiei mieloide cronice K562. De asemenea, a fost efectuată analiza compoziției de carbohidrați pentru a propune un mecanism structural de acțiune al acestei amplificări imune.

Mergi la:

Metode

MCP (PectaSol-C® MCP, EcoNugenics, Inc., Santa Rosa, CA, SUA) a fost solubilizat inițial în soluție salină tamponată cu fosfat (PBS). Solubilitatea MCP în PBS a fost de 76,4%. Volumul a fost ajustat pentru a obține cantități precise de compus pentru tratament pe baza factorului de solubilitate.

Analiza activării celulelor T, B și NK: au fost colectate probe de sânge de la trei voluntari sănătoși neidentificați, pe baza unui protocol de studiu de scutire, prezentat și aprobat de către Comitetul de evaluare instituțională al Spitalului pentru copii din Miami. S-au incubat probe de sânge (250 μl) în plăci cu 48 de godeuri, cu concentrații crescătoare de compus împreună cu martori pozitivi adecvați (recomandați de Becton Dickinson Biosciences, CA, SUA) pentru fiecare subset. CD2/CD2R și esteri de forbol (PMA) au fost utilizați ca martori pentru studiile de activare a celulelor T citotoxice. Mitogenul din cârmâz (PWM) a fost utilizat ca martor pozitiv pentru activarea celulelor B și IL-2 a fost utilizat pentru activarea celulelor NK în culturile de sânge. Culturile de sânge au fost incubate la 37°C într-un incubator cu CO2 timp de 24 de ore. În ziua următoare, o cantitate de 20 μl de amestec de anticorpi specifici [CD4-FITC/CD69-PE/CD45-PerCP (activarea celulei T helper/inductoare), CD8-FITC/CD69-PE/CD3-PerCP (activarea celulelor T citotoxice), CD19-FITC/CD69-PE/CD45-PerCP (activarea celulelor B) și CD56-FITC/CD69-PE/CD45-PerCP (activarea celulelor NK)] a fost distribuită în eprubete separate de flux (în duplicat) și o cantitate de 50 μl de probă de sânge s-a amestecat cu anticorp și a fost incubată timp de 30 de minute la temperatura camerei, la întuneric. Amestecul de sânge-anticorpi a fost lizat într-o stație de lucru Q-prep Coulter Epics utilizând kitul Immunoprep și rulat pe un citometru de flux Coulter Elite utilizând un protocol cu ​​3 culori. Procentul de celule T-helper, T citotoxice, B și NK activate și procentul de creștere comparativ cu martorul netratat au fost calculate și reprezentate în funcție de concentrațiile de compus.

Analiza activității celulelor NK funcționale: limfocite normale au fost izolate de la trei voluntari sănătoși folosind centrifugarea în pantă, în mediu Histopaque 1077. Celulele au fost spălate de două ori cu PBS și resuspendate în mediu RPMI 1640 fără fenol, suplimentat cu ser fetal bovin 10% și antibiotice (mediu complet). Celulele au fost placate în plăci speciale cu 48 de godeuri adânci (cu fund conic), 106 celule/ml/godeu și tratate cu concentrații crescătoare (0-800 ug/ml) de MCP într-un incubator cu CO2 5% la 37 °C timp de 24 de ore. În ziua următoare, celulele leucemice K562 în faza log au fost marcate cu colorant de membrană PKH26 (Sigma, St. Louis, MO, SUA) timp de 5 minute în conformitate cu protocolul producătorului și 0,2 x 106 celule fiecare au fost adăugate la limfocitele normale, în plăcile cu 48 de godeuri. Plăcile au fost centrifugate timp de 1 min. la 250 x g și returnate la incubatorul cu CO2 timp de încă 4 ore pentru inducerea morții celulare.

Amestecul celular a fost permeabilizat prin incubare în soluție de paraformaldehidă 2% la 4 °C urmată de incubare în soluție Tween 20 (PBS) 0,2% la 37 °C. Amestecul de celule a fost spălat cu PBS răcit cu gheață și colorat cu o formă activă specific umană marcată cu FITC de anticorp caspază 3 timp de 30 de minute la temperatura camerei, conform procedurii publicate anterior [34, 35]. Celulele colorate au fost spălate cu soluție Tween 20 0,1%, resuspendate în 0,5 ml soluție tampon de colorare și analizate printr-un protocol de citometrie în flux cu două culori, cu FL1 și FL2 măsurând PKH26 și respectiv FITC într-un citometru Beckman Coulter Elite Flow. Procentul de celule K562 pozitive pentru PKH26 și FITC a fost reprezentat de celulele moarte induse de celulele NK.

Analiză statistică: au fost calculate valorile medii și abaterile standard și graficele au fost întocmite în Microsoft Excel. Analiza varianței unidirecționale Kruskal-Wallis (ANOVA) a fost utilizată pentru a analiza datele folosind software-ul GraphPad Prism 5, iar valorile p au fost estimate. Au fost efectuate comparații multiple ale tratamentelor în toate combinațiile posibile prin post-testul Tukey-Kramer folosind software-ul GraphPad Prism 5.

Analiza compoziției de carbohidrați a MCP: analiza monozaharidelor a fost efectuată prin cromatografie performantă cu schimb de anioni cu detecție amperometrică a impulsului (HPAEC-PAD) după metanoliză, conform metodei publicate anterior [36]. HPAEC-PAD a fost, de asemenea, utilizat pentru analiza oligozaharidelor [32]. Analiza vâscozității intrinseci la greutate medie a fost efectuată prin cromatografie performantă cu excluderea mărimii (HPSEC), cu detectori multipli (împrăștierea luminii laser în unghiuri multiple, indice de refracție și vâscozimetru cu presiune diferențială, conform metodelor de publicare anterioare [30]).

Mergi la:

Rezultate

Activarea subtipului de limfocite T

Creșterile procentuale ale activării limfocitelor T-helper/inductoare și celulelor T citotoxice sunt prezentate în Figura 11 și, respectiv, 2. Toți martorii pozitivi au indus răspunsurile așteptate. Rezultatele arată că MCP nu are un efect semnificativ asupra activării celulelor T-helper/inductoare în comparație cu martorii pozitivi cum ar fi CD2/CD2R (< 0,01) și PMA (< 0,001). Cu toate acestea, MCP a activat celulele T citotoxice la niveluri mai mici și într-o manieră dependentă de doză între concentrațiile de 50-800 ug/ml. Activarea indusă de MCP a celulelor T citotoxice a fost semnificativă la 400 ug/ml (p < 0,05) și extrem de semnificativă la concentrațiile de 800 ug/ml (p < 0,01).

Creșterea activării celulelor T-helper/inductoare (%)

 

Figura 1

 

Creșterea activării celulelor T-Helper/inductoare (%) de MCP. (**< 0,01, ***< 0,001).

Creșterea activării celulelor T citotoxice (%)

 

Figura 2

Creșterea activării celulelor T citotoxice (%) de MCP. (**< 0,05, ***< 0,01).

Activarea celulelor B

Creșterea procentuală a MCP asupra activării celulelor B peste nivelul martorului netratat este prezentată în Figura 3.3. PWM pentru martorul pozitiv a indus o activare extrem de semnificativă la concentrații de 10 ug/ml (p < 0,01) și 25 ug/ml (p < 0,001). MCP a indus o activare dependentă de doză a celulelor B, deși nivelul de activare a fost mai mic decât cel al PWM și nu a fost semnificativ prin testul Tukey-Kramer.

Creșterea activării celulelor B (%)

 

Figura 3

Creșterea activării celulelor B (%) de MCP. (**< 0,01, ***< 0,001).

Activarea celulelor NK

Efectele MCP asupra creșterii procentuale a activării celulelor NK comparativ cu martorul netratat sunt date în Figura 4.4. Martorul pozitiv IL-2 la 6,6 ng/ml a indus un nivel semnificativ de activare a celulelor NK (p < 0,05). MCP a demonstrat o activare dependentă de doză a celulelor NK cu un nivel de semnificație mai mic (p < 0,05) atins la 200 ug/ml și un nivel semnificativ la concentrații de 400 și 800 ug/ml (p < 0,01).

Creșterea activării celulelor NK (%)

 

Figura 4

Creșterea activării celulelor NK (%) de MCP. (**< 0,05, ***< 0,01).

Activitatea celulelor MK activate de MCP asupra celulelor de leucemie mieloidă cronică K562

Rezultatele probelor de sânge tratate cu MCP privind creșterea procentuală a activității celulelor NK funcționale sunt prezentate în Figura 5.5. MCP induce activitatea celulelor NK într-o manieră dependentă de doză, cu o doză de 800 ug/ml determinând o creștere a activității celulelor NK de aproximativ 53,60% (p < 0,05). Tendința de creștere dependentă de doză în activitatea celulelor NK corespunde aparent cu activarea celulelor NK, obținută prin colorarea cu markeri de activare a celulelor NK (CD56/CD69/CD45).

Creșterea activității celulelor NK (% morții celulelor K562 comparativ cu leucocitele netratate)

 

Figura 5

Creșterea procentuală a activității celulelor NK de către MCP(*p < 0,05).

Analiza compoziției carbohidraților MCP

Compoziția monozaharidică a MCP a fost identificată și este raportată în Tabelul 1.1. MCP a constat în principal din acid galacturonic cu galactoză și arabinoză, cele mai comune zaharuri neutre. MCP a prezentat o cantitate mare de homogalacturonan comparativ cu ramnogalacturonan (raport GalA/Rha ridicat). În medie, magistrala homogalacturonan a MCP a fost întreruptă cu un rest de ramnoză o dată la fiecare 22 de resturi de acid galacturonic (Tabelul 1). Lanțurile laterale de zahăr neutre, arabinan, galactan sau arabinogalactan din pectină sunt atașate la resturile de ramnoză în ramnogalacturonan. Homogalacturonanul a constat atât din acizi oligogalacturonici saturați cât și nesaturați (Figura 6). Acizii oligogalacturonici nesaturați au avut timpi de retenție mai mari comparativ cu acizii oligogalacturonici saturați [36]. Se înregistrează masa molară medie MCP (3.320 Da), vâscozitatea medie intrinsecă (0.0648 dl/g) și constanta Mark Houwink (a = 0,824) (Tabelul 22).

Tabel 1

Compoziția de monozaharide MCP (mol %)

Monosaccharide Mole %
Glucose 2.17
Arabinose 3.28
Galactose 10.31
Xylose 1.45
Rhamnose 3.53
Fructose 0.13
Galacturonic Acid 79.03
Glucuronic Acid 0.11
Galacturonic Acid/Rhamnose 22.39

 

 

Răspuns [nA] / Timp [min]

Deschide într-o fereastră separată

Figura 6

Analiza HPAEC-PAD a MCP (1), comparativ cu un hidrolizat de acid poligalacturonic (2). Gradul de polimerizare este menționat pe vârfuri. Săgețile indică acizii oligogalacturonici nesaturați.

Tabel 2

Greutatea moleculară medie, analiza vâscozității intrinseci și a formei MCP (constanta Mark Houwink)

Average Molar Mass (Da) Average Intrinsic Viscosity (dL/g) Mark Houwink Constant (a)
3,320 ± 300 0.0648 ± 0.001 0.824 ± 0.03

Valorile sunt ± SD

Mergi la:

Discuție

Sistemul imunitar protejează oamenii împotriva bolilor cauzate de microorganisme și alte materii dăunătoare. Sângele circulant transportă componente imunitare între organele sistemului imunitar și locurile de inflamație. Analizele enumerative (analiza markerilor de activare) și funcționale (analiza activității celulelor NK) utilizate în prezentul studiu pentru a evalua potențialul imunostimulator al MCP au demonstrat în mod clar activarea celulelor T citotoxice și NK în culturile de sânge in vitro. În plus, analiza funcțională a indicat că MCP a crescut citoliza celulelor leucemice de către celulele NK. Este bine cunoscut faptul că activitatea celulelor NK este reglată de nivelurile de expresie ale moleculelor citotoxice, receptorilor activatori și/sau receptorilor inhibitori. Chiar dacă s-a demonstrat că mai mulți agenți CAM activează celulele NK și îmbunătățesc activitatea celulelor NK, mecanismul exact nu este clar definit. Cele două posibilități principale sunt: (i) augmentarea moleculelor citotoxice în celulele NK și/sau (ii) reglarea în sens crescător a receptorilor NK activatori și/sau reglarea în sens descrescător a receptorilor NK inhibitori [37, 38].

Mecanismul imunostimulării selective a celulelor T citotoxice și NK de către MCP poate fi speculativ. Se sugerează că, exceptând un grad mai scăzut de esterificare, compoziția de oligozaharide pectice MCP și greutatea moleculară sunt destul de similare cu cele ale altor oligozaharide pectice raportate să polarizeze răspunsul T helper față de Th1 într-un model de vaccinare a gripei murine [19] și cu acelea utilizate în studiile ulterioare ale astmului alergic murin [20] și privind hrănirea cu lapte praf a sugarilor umani [39]. Prin urmare, oligozaharidele pectice nesaturate par a fi necesare pentru imunostimulare și un grad relativ ridicat de esterificare poate fi necesar pentru stimularea celulelor T helper.

Vâscozitatea medie intrinsecă a pectinei este direct proporțională cu masa molară, demonstrând astfel un interval de greutate moleculară mai scăzută a MCP comparativ cu 14,800 Da și 0,398 dl/g, raportate anterior [30]. Concentrația scăzută a constantei Mark Houwink pentru MCP comparativ cu valoarea 1.45 pe care am observat-o anterior [30] înseamnă că structura globală are mai degrabă formă de bobină aleatorie, tipică pectinei citrice, în timp ce o constantă mai mare Mark Houwink (a) a fost interpretată ca fiind mai rigidă și asemănătoare unui baston. Prin urmare, MCP este un polimer flexibil de pectină cu greutate moleculară mică, îmbogățit în acizi oligogalacturonici saturați și nesaturați.

Dozele MCP utilizate anterior în studiile pre-clinice in vivo (0,1% – 4,0% administrat pe cale orală) și în studiile clinice umane (15 g/zi administrat pe cale orală) au demonstrat un efect asupra creșterii tumorale, angiogenezei, markerilor de progresie a cancerului și metastazelor spontane [810,24,28,29] și la reducerea sarcinii corpului de metale grele cum se vede în nivelurile de excreție în sânge și urină [30,31]. Aceste doze au avut un efect asupra nivelurilor de galectină-3 în leziunile renale induse experimental, ceea ce a dus la scăderea leziunilor renale și a fibrozei [32]. Concentrațiile MCP utilizate în cadrul prezentei cercetări (până la 0,08%) sunt inferioare dozelor utilizate anterior în studiile preclinice, care pot fi realizabile și eficiente pentru modularea sistemului imunitar. Cu toate acestea, sunt necesare investigații detaliate privind farmacocinetica MCP prin analiza absorbției și distribuției in vivo pentru a determina doza orală eficientă.

Mergi la:

Concluzii

Datele arată ca MCP ca o substanță cu proprietăți imunostimulatorii în probele de sânge uman, incluzând activarea celulelor NK funcționale împotriva celulelor leucemice K562 în cultură. Se presupune că proprietățile imunostimulatorii selective sunt atribuite prezenței unui nivel scăzut de esterificare a metilului și acizilor oligogalacturonici nesaturați. Cercetări suplimentare sunt necesare pentru a determina dacă modificarea gradului de esterificare a acidului oligogalacturonic în MCP poate modifica răspunsul imun. Studiile in vivo sunt necesare pentru a înțelege mai bine aplicațiile MCP ca potențator imunitar.

Mergi la:

Lista de abrevieri

DMSO: Dimetil sulfoxid; MCP: Pectină citrică modificată; NK: Natural killer; PBS: Ser fiziologic tamponat cu fosfat; SD: Abatere standard.

Mergi la:

Interese concurente

Autorii CR, AH, HC și SJM declară că nu au interese concurente.

Autorii BJW și IE sunt angajați de EcoNugenics, Inc., producătorul MCP folosit în acest studiu. IE deține brevete privind metoda și utilizarea MCP.

Mergi la:

Contribuțiile autorilor

CR a conceput și a contribuit la interpretarea datelor imunologice. SJM a proiectat, a obținut date, a efectuat analize și interpretarea datelor imunologice. AH a proiectat, a obținut date, a efectuat analize și interpretarea datelor analizei moleculare. HC a obținut date, a efectuat analize și interpretarea datelor analizei moleculare. BJW și IE au contribuit la proiectarea studiului, la revizuirea datelor și la interpretarea tuturor datelor. Toți autorii au contribuit la redactarea manuscrisului, contribuind critic la conținutul său intelectual și au citit și au dat aprobarea manuscrisului final.

Mergi la:

Istoricul dinaintea publicării

Istoricul dinaintea publicării pentru această lucrare poate fi accesat aici:

http://www.biomedcentral.com/1472-6882/11/59/prepub

Mergi la:

Mulțumiri și finanțare

Acest studiu a fost finanțat de un grant de cercetare de la Econugenics, Inc. Un acord de cooperare în cercetare și dezvoltare cu Econugenics, Inc. i-a susținut pe AH și HC.

Mergi la:

Bibliografie

  1. Anderson JW, Jones AE, Riddell-Mason S. Ten different dietary fibers have significantly different effects on serum and liver lipids of cholesterol-fed rats. J Nutr. 1994;124:78–83. [PubMed]
  2. Anderson JW. Dietary fiber, complex carbohydrate and coronary artery disease. Can J Cardiol. 1995;11:55G–62G. [PubMed]
  3. Bingham SA, Day NE, Luben R, Ferrari P, Slimani N, Norat T, Clavel-Chapelon F, Kesse E, Nieters A, Boeing H, Tjønneland A, Overvad K, Martinez C, Dorronsoro M, Gonzalez CA, Key TJ, Trichopoulou A, Naska A, Vineis P, Tumino R, Krogh V, Bueno-de-Mesquita HB, Peeters PH, Berglund G, Hallmans G, Lund E, Skeie G, Kaaks R, Riboli E. Dietary fiber in food and protection against colorectal cancer in the European Prospective Investigation into Cancer and Nutrition (EPIC): an observational study. Lancet. 2003;361:1496–1501. doi: 10.1016/S0140-6736(03)13174-1. [PubMed][Cross Ref]
  4. Chen CH, Sheu MT, Chen TF, Wang YC, Hou WC, Liu DZ, Chung TC, Liang YC. Suppression of endotoxin induced proinflammatory responses by citrus pectin through blocking LPS signaling pathways. Biochem Pharmacol. 2006;72:1001–1009. doi: 10.1016/j.bcp.2006.07.001. [PubMed] [Cross Ref]
  5. Nangia-Makker P, Conklin J, Hogan V, Raz A. Carbohydrate-binding proteins in cancer, and their ligands as therapeutic agents. Trends Mol Med. 2002;8:187–192. doi: 10.1016/S1471-4914(02)02295-5. [PubMed] [Cross Ref]
  6. Kidd P. A new approach to metastasis cancer prevention: modified citrus pectin (MCP), a unique pectin that blocks cell surface lectins. Altern Med Rev. 1996;1:4–10.
  7. Olano-Martin E, Rimbach GH, Gibson GR, Rastall RA. Pectin and pectic-oligosaccharides induce apoptosis in in vivo human colonic adenocarcinoma cells. Anticancer Res. 2003;23:341–346. [PubMed]
  8. Nangia-Makker P, Hogan V, Honjo Y, Baccarini S, Tait L, Bresalier R, Raz A. Inhibition of human cancer cell growth and metastasis in nude mice by oral intake of modified citrus pectin. J Natl Cancer Ins. 2002;94:1854–1862. [PubMed]
  9. Guess BW, Scholz MC, Strum SB, Lam RY, Johnson HJ, Jennrich RI. Modified citrus pectin (MCP) increases the prostate-specific antigen doubling time in men with prostate cancer: a phase II pilot study. Prostate Cancer Prostatic Dis. 2003;6:301–304. doi: 10.1038/sj.pcan.4500679. [PubMed] [Cross Ref]
  10. Pienta KJ, Naik H, Akhtar A, Yamazaki K, Replogle TS, Lehr J, Donat TL, Tait L, Hogan V, Raz A. Inhibition of spontaneous metastasis in a rat prostate cancer model by oral administration of modified citrus pectin. J Natl Cancer Inst. 1995;87:348–353. doi: 10.1093/jnci/87.5.348. [PubMed] [Cross Ref]
  11. Yan J, Katz A. PectaSol-C modified citrus pectin induces apoptosis and inhibition of proliferation in human and mouse androgen-dependent and- independent prostate cancer cells. Integr Cancer Ther. 2010;9:197–203. doi: 10.1177/1534735410369672.[PubMed] [Cross Ref]
  12. Glinsky VV, Raz A. Modified citrus pectin anti-metastatic properties: one bullet multiple targets. Carbohydr Res. 2009;14:1788–91. [PMC free article] [PubMed]
  13. Ye MB, Lim BO. Dietary pectin regulates the levels of inflammatory cytokines and immunoglobulins in interleukin-10 knockout mice. J Agric Food Chem. 2010. in press . [PubMed]
  14. Sherry CL, Kim SS, Dilger RN, Bauer LL, Moon ML, Tapping RI, Fahey GC Jr, Tappenden KA, Freund GG. Sickness behavior induced by endotoxin can be mitigated by the dietary soluble fiber, pectin, through up-regulation of IL-4 and Th2 polarization. Brain Behav Immun. 2010;24:631–40. doi: 10.1016/j.bbi.2010.01.015.[PMC free article] [PubMed] [Cross Ref]
  15. Salman H, Bergman M, Djaldetti M, Orlin J, Bessler H. Citrus pectin affects cytokine production by human peripheral blood mononuclear cells. Biomed Pharmacother. 2008;62:579–82. doi: 10.1016/j.biopha.2008.07.058. [PubMed] [Cross Ref]
  16. Liu Y, Ahmad H, Luo Y, Gardiner DT, Gunasekera RS, McKeehan WL, Patil BS. Citrus pectin: characterization and inhibitory effect on fibroblast growth factor – receptor interaction. J Ag Food Chem. 2001;49:3051–3057. doi: 10.1021/jf001020n.[PubMed] [Cross Ref]
  17. Matsumoto T, Moriya M, Sakurai MH, Kiyohara H, Tabuchi Y, Yamada H. Stimulatory effect of a pectic polysaccharide from a medicinal herb, the roots of Bupleurm falcatum L., on G-CSF secretion from intestinal epithelial cells. Int Immunopharmacol. 2008;8:581–588. doi: 10.1016/j.intimp.2008.01.006. [PubMed][Cross Ref]
  18. Inngjerdingen M, Inngjerdingen KT, Patel TR, Allen S, Chen X, Rolstad B, Morris GA, Harding SE, Michaelsen TE, Diallo D, Paulsen BS. Pectic polysaccharides from Biophytum petersianum Klotzsch, and their activation of macrophages and dendritic cells. Glycobiology. 2008;18:1074–84. doi: 10.1093/glycob/cwn090. [PubMed][Cross Ref]
  19. Vos AP, Haarman M, van Ginkel JW, Knol J, Garssen J, Stahl B, Boehm G, M’Rabet L. Dietary supplementation of neutral and acidic oligosaccharides enhances Th1-dependent vaccination responses in mice. Pediatr Allergy Immunol. 2007;18:304–312. doi: 10.1111/j.1399-3038.2007.00515.x. [PubMed] [Cross Ref]
  20. Vos AP, van Esch BC, Stahl B, M’Rabet L, Folkerts G, Nijkamp FP, Garssen J. Dietary supplementation with specific oligosaccharide mixtures decreases parameters of allergic asthma in mice. Int Immunopharmacol. 2007;7:1582–1587. doi: 10.1016/j.intimp.2007.07.024. [PubMed] [Cross Ref]
  21. Zou J, Glinsky VV, Landon LA, Matthews L, Deutscher SL. Peptides specific to the galectin-3 carbohydrate recognition domain inhibit metastasis-associated cancer cell adhesion. Carcinogenesis. 2005;26:309–318. [PubMed]
  22. Johnson KD, Glinskii OV, Mossine VV, Turk JR, Mawhinney TP, Anthony DC, Henry CJ, Huxley VH, Glinsky GV, Pienta KJ, Raz A, Glinsky VV. Galectin-3 as a potential therapeutic target in tumors arising from malignant endothelia. Neoplasia. 2007;9:662–670. doi: 10.1593/neo.07433. [PMC free article] [PubMed] [Cross Ref]
  23. Nangia-Makker P, Honjo Y, Sarvis R, Akahani S, Hogan V, Pienta KJ, Raz A. Galectin-3 induces endothelial cell morphogenesis and angiogensis. Am J Pathol. 2000;156:899–909. doi: 10.1016/S0002-9440(10)64959-0. [PMC free article][PubMed] [Cross Ref]
  24. Inohara H, Raz A. Effects of natural complex carbohydrate (citrus pectin) on murine melanoma cell properties related to galectin-3 functions. Glycoconj J. 1994;11:527–532. doi: 10.1007/BF00731303. [PubMed] [Cross Ref]
  25. Gunning AP, Bongaerts RJ, Morris VJ. Recognition of galactan components of pectin by galectin-3. FASEB J. 2009;23:415–424. [PubMed]
  26. Platt D, Raz A. Modulation of the lung colonization of B16-F1 melanoma cells by citrus pectin. J Natl Cancer Inst. 1992;84:438–442. doi: 10.1093/jnci/84.6.438.[PubMed] [Cross Ref]
  27. Glinsky VV, Huflejt M, Glinsky G, Deutscher S, Quinn T. Effects of Thomsen-Friendenreich antigen-specific peptide p-30 on β-galactoside-mediated homotypic aggregation and adhesion to the endothelium of MDA-MB-435 human breast carcinoma cells. Cancer Res. 2000;60:2584–2588. [PubMed]
  28. Liu HY, Huang ZL, Yang GH, Lu WQ, Yu NR. Inhibitory effect of modified citrus pectin on liver metastases in a mouse colon cancer model. World J Gastroenterol. 2008;14:7386–7391. doi: 10.3748/wjg.14.7386. [PMC free article] [PubMed][Cross Ref]
  29. Azemar M, Hildenbrand B, Haering B, Heim ME, Unger C. Clinical benefit in patients with advanced solid tumors treated with modified citrus pectin: a prospective pilot study. Clin Med: Oncol. 2007;1:73–80.
  30. Eliaz I, Hotchkiss A, Fishman M, Rode D. The effect of modified citrus pectin on urinary excretion of toxic elements. Phytother Res. 2006;20:859–864. doi: 10.1002/ptr.1953. [PubMed] [Cross Ref]
  31. Zhao ZY, Liang L, Fan X, Yu Z, Hotchkiss AT, Wilk BJ, Eliaz I. The role of modified citrus pectin as an effective chelator of lead in children hospitalized with toxic lead levels. Altern Ther Health Med. 2008;14:34–38. [PubMed]
  32. Kolatsi-Joannou M, Price KL, Winyard PJ, Long DA. Modified citrus pectin reduces galectin-3 expression and disease severity in experimental acute kidney injury. PLoS One. 2011;6:e18683. doi: 10.1371/journal.pone.0018683. [PMC free article] [PubMed][Cross Ref]
  33. Lim LC, Fiordalisi MN, Mantell JL, Schmitz JL, Folds JD. A whole-blood assay for qualitative and semiquantitative measurements of CD69 surface expression on CD4 and CD8 T lymphocytes using flow cytometry. Clin Diagn Lab Immunol. 1998;5:392–398. [PMC free article] [PubMed]
  34. Liu L, Chahroudi A, Silvestri G, Wernett ME, Kaiser WJ, Safrit JT, Komoriya A, Altman JD, Packard BZ, Feinberg MB. Visualization and quantification of T cell-mediated cytotoxicity using cell-permeable fluorogenic caspase molecules. Nat Med. 2000;8:185–189. [PubMed]
  35. Jerome KR, Sloan DD, Aubert M. Measuring T-cell mediated cytotoxicity using antibody to activated caspases. Nat Med. 2002;9:4–5. doi: 10.1038/nsb0102-4.[PubMed] [Cross Ref]
  36. Hotchkiss AT, Hicks KB. Analysis of pectate lyase-generated oligogalacturonic acids by high-performance anion-exchange chromatography and pulsed amperometric detection. Carbohydr Res. 2003;247:1–7.
  37. Robertson MJ, Ritz J. Biology and clinical relevance of natural killer cells. Blood. 1990;76:2421–2438. [PubMed]
  38. Takeda K, Okumura K. CAM and NK Cells. eCAM. 2010;1:17–27. [PMC free article][PubMed]
  39. Fanaro S, Jelinek J, Stahl B, Boehm G, Kock R, Vigi V. Acidic oligosaccharides from pectin hydrolysate as new component for infant formulae: Effect on intestinal flora, stool characteristics, and pH. J Pediatr Gasteroentero Nutrit. 2005;41:186–190. doi: 10.1097/01.mpg.0000172747.64103.d7. [PubMed] [Cross Ref]

Lasă un răspuns

Completează mai jos detaliile tale sau dă clic pe un icon pentru a te autentifica:

Logo WordPress.com

Comentezi folosind contul tău WordPress.com. Dezautentificare /  Schimbă )

Fotografie Google+

Comentezi folosind contul tău Google+. Dezautentificare /  Schimbă )

Poză Twitter

Comentezi folosind contul tău Twitter. Dezautentificare /  Schimbă )

Fotografie Facebook

Comentezi folosind contul tău Facebook. Dezautentificare /  Schimbă )

Conectare la %s

Acest sit folosește Akismet pentru a reduce spamul. Află cum sunt procesate datele comentariilor tale.